问了身边很好小伙伴，很多人都认为蛋白免疫共沉淀Co-immunoprecipitation(Co-IP)非常高大上，对其中的原理也是难以理解，今天就给大家来讲解一下。

首先，先介绍一下基本原理，介绍完之后会用图片进行逐步讲解，可能会更生动更容易理解。

Co-IP

原理

Co-IP是以抗原抗体反应的专一性为基础，确定两种蛋白质在生理条件下是否有结合的方法。当细胞被非变性地裂解，细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质的结合仍然存在，这个时候如果加入蛋白质A的抗体，抗体可以与蛋白质A结合，而部分蛋白质A又与蛋白质B有结合，那么就形成了蛋白A+抗体+蛋白B的复合物，这个时候再用珠子与抗体结合，那么就形成了蛋白A+抗体+蛋白B+珠子的复合物，接着再离心，把这个复合物沉淀下来，去掉上清，加上上样缓冲液，95度煮，蛋白A和蛋白B之间的binding被打开，均变成了线性结构，煮完后再离心将沉淀（也就是珠子）弃掉，吸取上清跑WB，检测是否有蛋白B，如果有，则可以说明蛋白A和蛋白B直接确实有binding。

原理如上，接下来我们上图，可以更好地理解。

现在是收至EP管中的细胞样本。

接着是加入裂解液后，细胞被裂解产生的蛋白样品。其中绿色是我们的蛋白A，红色是我们想要检测是否与蛋白A有binding的蛋白B。

加入针对蛋白A的抗体（“Y”表示抗体，重链和轻链）

孵育一段时间后，抗体与蛋白A（绿色蛋白）结合，同时，也可以从上面这张示意图中看出，部分的蛋白A（绿色）和蛋白B（红色）有结合。

这个时候加入珠子，珠子可以与我们加入的抗体（“Y”）结合，这个珠子是IgG琼脂糖珠。

由于珠子相对蛋白，质量较重，离心后，可以将珠子离下来，并将蛋白A拉下来，那么和蛋白A有结合的蛋白B也同时被拉了下来。

弃上清，然后用适当的洗涤剂洗涤3-4次，去除一些非特异性结合的蛋白，最后再离心，弃上清。

在沉淀中加入2X的上样缓冲液（20-40ul左右），95度煮，此时蛋白会变成线性结构，天然构象消失，故蛋白之间的结合也分开了。

接着就可以收集上清去跑WB，检测是否蛋白A可以拉出蛋白B了。

注：图片来自于JOVE网站

好，今天的原理图解就介绍到这里，希望大家有所收获。

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